独立行政机构国立产业技术综合研究所[会长野间口裕](以下简称“AIST”)生物过程研究部[研究部主任镰形阳一]合成生物技术研究组研究组组长宫崎健太郎、首席研究员安武义明、国立大学法人大阪大学信息科学研究生院研究员北原圭(前AIST特别研究员)等被认为是生物物种独有的16S rRNA基因可以用来自不同物种的物质代替。
核糖体是由3种RNA和57种蛋白质组成的超分子复合物,翻译它有一个功能。由于其重要的生理作用和三维结构的复杂性,它被认为是一种极难因进化而改变的分子。特别是核糖体 30S 亚基中包含的16S rRNA是细菌物种特异性基因系统发育分类学的指标这次,大肠杆菌16S rRNA基因缺陷菌株生长互补测试和纲我们证明,来自远缘相关生物的不同水平的 16S rRNA 可以在大肠杆菌中发挥作用。这一结果表明,原本被认为具有物种特异性的16S rRNA基因已经跨物种传播。水平传播这表明这可能是可能的,并对微生物的传统系统发育分类学的基础产生了怀疑。
该结果详细发表于2012年10月30日(日本时间)的美国学术期刊美国国家科学院院刊(美国国家科学院院刊)。
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图1 核糖体30S亚基三维结构 核糖体30S亚基是由16S rRNA(绿色)和21种蛋白质(白色)组成的超分子复合物。 |
核糖体是所有生物中都存在的细胞器,含有核酸代码将遗传信息转化为功能(蛋白质)。负责这些高级生物功能的核糖体具有复杂的三维结构;在细菌中,它们由三种类型的RNA和多达57种类型的蛋白质组成。每个成分密切相互作用,并且人们认为成分中的许多基因突变会导致功能破坏(细胞死亡)。特别是RNA,因其三维结构而占据核糖体的中心,对基因突变高度敏感,人们认为即使是最轻微的基因突变也会导致核糖体功能的破坏。事实上,30S亚基中包含的16S rRNA是一种物种特异性分子,多年来一直被用作微生物系统发育分类学的指标。
AIST 搜寻未知微生物,基因组我在探索和利用微生物功能方面进行了广泛的研究,包括分析、寻找有用的基因以及通过进化分子工程修改基因功能。最近,核糖体突变分析发现大肠杆菌核糖体除了其原有的翻译功能外,还具有抑制核糖核酸酶活性的功能(2011 年 11 月 25 日 AIST 新闻稿)。这一结果也是通过核糖体的详细功能分析获得的。
这项研究得到了文部科学省的科学研究补助金(领域名称:为合成生物学奠定基础,以了解动态和多元素生物分子网络)“通过修改翻译系统创建人工细胞”(2012年),日本学术振兴会这项工作得到了具有挑战性的探索性研究“通过rRNA替换突变研究核糖体可塑性”(2012财年)和日本学术振兴会科学研究补助金(B)“开发用于综合表达宏基因组基因的大肠杆菌宿主”(2011-2011财年)。
AIST初步了解到30S核糖体亚基中包含的16S rRNA被来自外来生物体的16S rRNA取代,这次环境 DNA(宏基因组学)分离的16S rRNA,进行了全面系统的水平传播实验。 (图2)。
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图2 核糖体30S亚基三维结构及16S rRNA基因水平转移实验 我们用大肠杆菌 16S rRNA(绿色)替换了来自不同物种的 16S rRNA(图中的红色和蓝色),以检查是否可以基于功能互补性进行选择。 |
环境 DNA 是环境中所含微生物基因组的混合物,极其多样化。 16S rRNA 基因的末端序列因微生物物种而异同源性是高寡核苷酸引物PCR(聚合酶链式反应)方法放大将以此方式从不同物种获得的16S rRNA基因导入16S rRNA缺陷型大肠杆菌菌株中。 16S rRNA 基因对于生长至关重要,如果导入的 16S rRNA 在大肠杆菌中不起作用,细胞将无法生长。利用这一特性,我们确定了引入的 16S rRNA 的功能。其结果,即使是来自与大肠杆菌的16S rRNA基因在类水平上不同的微生物的16S rRNA基因(序列同源性约80%),也能够使大肠杆菌生长。扩散加倍时间是野生型的大约35分钟相比,最多也就90分钟左右。
此外,为了研究序列同源性较低的16S rRNA如何整合到复杂核糖体中以及序列差异如何影响结构和功能,我们将获得的序列与大肠杆菌相应部分的各自二级结构进行了比较。作为一个典型的例子,螺旋 21的区域的序列差异和二级结构如图所示(图 3)。已发现,即使碱基序列不同,只要维持二级结构,16S rRNA的功能在许多情况下也能维持,并且即使对于被认为具有物种特异性的16S rRNA,也发现二级结构而不是序列本身对于发挥其功能很重要。
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图 3 大肠杆菌 16S rRNA 的螺旋 21 区域的结构以及源自不同物种且在大肠杆菌中发挥作用的 16S rRNA
大肠杆菌是大肠杆菌的16S rRNA基因。 A01和A02是在大肠杆菌16S rRNA基因缺陷菌株中起作用的异源16S rRNA基因的代表性实例。与大肠杆菌相比,红色部分发生了突变。 |
16S rRNA基因被认为是物种特异性的,这一发现在类水平上与不同物种表现出同源性,这意味着16S rRNA存在充足的变异空间。这对基于 16S rRNA 物种特异性的传统系统发育分类法提出了质疑。尽管迄今为止有少数研究报道了含有多个 16S rRNA 的微生物,这些 16S rRNA 的基因组序列差异很大,但仍有必要重新考虑传统的系统发育分类学。
16S rRNA 的功能互补可以在细菌中跨物种发生,这一事实意味着包含 16S rRNA 的核糖体本身是一个比以前认为的更加可变的分子。这导致核糖体的主动功能修饰。由于核糖体功能的微小差异可以改变细胞内的整体蛋白质表达,因此修饰核糖体功能的方法可能会发展为细胞工程的新方法。